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秘:如何選擇一臺稱心的凝膠成像系統(tǒng)

[2019/7/11]

凝膠成像系統(tǒng)幾乎是每個分子生物學實驗室的必需品。幾十年來,凝膠成像的設(shè)備已經(jīng)從簡單的紫外線和寶麗來相機

發(fā)展到先進的數(shù)字化數(shù)據(jù)采集和分析系統(tǒng)。它的用途是從瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠上分離的DNA中獲取信息。


據(jù)Bio-Rad的全球產(chǎn)品經(jīng)理RaymondMiller介紹,目前很難研究市場,并確定誰是凝膠成像系統(tǒng)的客戶,因為這個系統(tǒng)的

應用如此廣泛!斑@是一種無處不在的技術(shù)。如果你身處生命科學領(lǐng)域,你就需要用到凝膠成像系統(tǒng)。”


在此,我們就介紹一些選購時的重要考慮因素,包括多功能、靈敏度、動態(tài)范圍和易用程度。

靈敏度和動態(tài)范圍

盡管一些DNA成像應用只需要粗略的測定或“有沒有”的結(jié)果,但大多數(shù)的研究人員還是希望獲得最佳的數(shù)據(jù)質(zhì)量。在選


購凝膠成像系統(tǒng)時,靈敏度和動態(tài)范圍往往是兩個重要的考慮因素。


很多人認為,相機分辨率是評估系統(tǒng)靈敏度的最佳參數(shù),但Uvitec公司的經(jīng)理KarineVictory認為,“事實上,靈敏度是通


過大的鏡頭光圈、出色的低噪聲相機、電子噪聲的進一步深度冷卻以及樣品與光圈的最近距離來實現(xiàn)的!彼嵝颜f,拼

接(binning)的做法可能犧牲CCD相機的分辨率。它允許在圖像捕獲時收集更多的光,但通過降低像素總數(shù)來降低總的分辨率。


靈敏度是UVP(德國耶拿旗下公司)開發(fā)凝膠成像系統(tǒng)時優(yōu)先考慮的事情。GelDoc-ItTS3是一臺獨立的成像系統(tǒng),適合DNA

和蛋白凝膠。它帶有500萬像素的相機和廣角f/1.2鏡頭,以提供高分辨率和快速圖像捕獲。這個系統(tǒng)還可以升級到-57oC的

CCD冷卻相機,用于化學發(fā)光成像。


UVP的產(chǎn)品經(jīng)理SarahChaudhury認為,最新一代的GelDoc-It系列成像系統(tǒng)的進步包括“更靈敏的相機和光學元件,

以及一鍵式的圖像捕獲和分析自動化”。


動態(tài)范圍與靈敏度密切相關(guān)。動態(tài)范圍寬,則意味著在同一幅圖像中可檢測到低水平和高水平的樣品。對于某些應用而言

,動態(tài)范圍是重要的考慮因素,例如監(jiān)控刺激化合物的影響或抑制劑對表達的影響。


LI-CORBiosciences提供了動態(tài)范圍超過6個對數(shù)的儀器。據(jù)LI-COR的產(chǎn)品營銷經(jīng)理JeffHarford介紹,這意味著圖像不會飽和。

這家公司的OdysseyFc成像儀是為EB、SYTO60或SYBR等染料染色的DNA凝膠而設(shè)計的,并配有一次性托盤,以減少污染。

OdysseyCLx適用于SYTO60染料。


Harford表示,在評估凝膠成像系統(tǒng)時,數(shù)據(jù)采集的一致性也需要認真考慮!皠討B(tài)范圍寬的技術(shù)有助于各塊凝膠之間獲得一致的數(shù)據(jù)。

確保技術(shù)是面向未來的。出版社很關(guān)心數(shù)據(jù)的可靠性和重復性,因此你需要確保你的系統(tǒng)每天提供穩(wěn)定的數(shù)據(jù)。

系統(tǒng)是否能做什么來消除凝膠或印跡之間的差異,這是很重要的!彼f。


多功能

盡管一臺簡單、專用的凝膠成像系統(tǒng)似乎是一個不錯的選擇,但大多數(shù)客戶感興趣的是多功能的系統(tǒng),這指的是所分析的凝膠類型、

檢測方法和應用范圍。為此,許多制造商生產(chǎn)出多功能的儀器,如多重熒光檢測、兼容比色樣品,甚至有更多的應用,

如Western分析或組織切片分析。


GEHealthcare生命科學部就提供一系列激光掃描儀,有著靈活的應用。它的AmershamTyphoon5生物分子成像儀可以對熒光、

放射性標記和比色樣品進行成像、除了適用于DNA凝膠、蛋白凝膠和印跡,這個系統(tǒng)還可以成像和分析微孔板、培養(yǎng)皿、組織切片及其他許多樣品類型。


除了激光掃描儀,GE還提供了兩款CCD相機系統(tǒng)–ImageQuantLAS500和更先進的AmershamImager600,可用于DNA凝膠成像。

GEHealthcare的資深科學家ErikBjerneld認為,研究人員在選擇成像儀時,應當考慮是否需要化學發(fā)光檢測。

“如果用戶主要對化學發(fā)光感興趣,那么我們建議用CCD成像系統(tǒng)。如果熒光成像的靈敏度和分辨率更加重要,則建議使用激光掃描儀,”他說。


安全性和易用性

目前市場上有一個趨勢,就是凝膠成像的自動化。這意味著,你只要將凝膠放入系統(tǒng)中,按下按鈕就能完成分析。大多數(shù)系統(tǒng)提供一定程度的自動化。

例如,UVP的GelDoc-ItTS3配備了廣泛的自動化功能。VisionWorks軟件可以利用預設(shè)的拍攝參數(shù),

如自動曝光、對焦、縮放等實現(xiàn)一鍵式的圖像采集。


用戶考慮的另一個因素是安全性,這主要涉及到EB的使用。大家都知道,EB是誘變劑,需要特殊處理。

平時,人們都會使用手套、防護設(shè)備,并防止儀器被EB污染。

如今,許多更安全的染料可用于DNA凝膠,而儀器制造商也對成像系統(tǒng)進行了相應的優(yōu)化,以支持這些更安全的選擇。


易用性也是Bio-Rad產(chǎn)品的一大特點。它的產(chǎn)品包括入門級GelDocEZ系統(tǒng)、功能更全的GelDocXR+系統(tǒng),

以及適用于工業(yè)規(guī)模凝膠成像的GS-900校準密度計。“我們投入了大量精力讓這些系統(tǒng)更加易用,”Miller說。

這包括大部分凝膠成像工作的自動化,比如縮放和對焦。


如今,DNA凝膠成像系統(tǒng)的市場十分成熟,也充滿競爭,在每個價格點都有多個選擇?偟膩碚f,

個體需求和具體應用始終是首要的考慮因素,比如儀器在特定染料上的表現(xiàn)及檢測方法的切換能力。

人們也許很難找到儀器在特定應用中的一對一比較數(shù)據(jù),因此需要密切留意產(chǎn)品資料,并與銷售代表溝通。

當然,這個系統(tǒng)應當是面向未來的,考慮到現(xiàn)在及將來的需求。



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