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為什么細(xì)胞培養(yǎng)需要用二氧化碳培養(yǎng)箱

[2017/12/4]

一般細(xì)胞培養(yǎng)液的pH7.0-7.4之間。由于碳酸鹽pH緩沖系統(tǒng)是一種生理pH緩沖系統(tǒng)(它是人體血液中最重要的pH緩沖系統(tǒng)),所以大多數(shù)培養(yǎng)液用它來(lái)保持穩(wěn)定的pH。用粉末配制培養(yǎng)液時(shí),常常需要加入一定量的碳酸氫鈉。對(duì)大多數(shù)以碳酸鹽作為pH緩沖系統(tǒng)的培養(yǎng)液而言,以為了維持穩(wěn)定的pH,培養(yǎng)箱中的二氧化碳需要維持在2-10%之間,以保持培養(yǎng)液中溶解的二氧化碳的濃度。同時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)的器皿需要一定程度的透氣,以便于氣體的交換。

是不是采用其他pH緩沖系統(tǒng)就不需要二氧化碳培養(yǎng)箱了呢?人們發(fā)現(xiàn)由于空氣中的二氧化碳濃度很低,如果細(xì)胞不在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),培養(yǎng)液中的HCO3-會(huì)被耗盡,這樣會(huì)影響細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。所以大部分動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng),還是需要二氧化碳培養(yǎng)箱。

   在過(guò)去的數(shù)十年間,細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、藥理學(xué)等的研究領(lǐng)域都有了驚人的長(zhǎng)足進(jìn)步,同時(shí),這些領(lǐng)域中的技術(shù)應(yīng)用也不得不跟上“腳步"。雖然典型的生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有了很大的改變,但二氧化碳培養(yǎng)箱依然是實(shí)驗(yàn)室中的主要組成部分,其使用的最終目的都是維持和促使細(xì)胞和組織更好地生長(zhǎng)。然而,隨著技術(shù)的進(jìn)步,其功能和運(yùn)作都變得越來(lái)越精確、可靠和方便。如今,二氧化碳培養(yǎng)箱已成為實(shí)驗(yàn)室最普遍使用的常規(guī)儀器之一,已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)、微生物、農(nóng)業(yè)科學(xué)、藥物學(xué)的研究和生產(chǎn)。

CO2培養(yǎng)箱是通過(guò)對(duì)周?chē)h(huán)境條件的控制制造出一個(gè)能使細(xì)胞/組織更好地生長(zhǎng)的環(huán)境,條件控制的結(jié)果就會(huì)形成一個(gè)穩(wěn)定的條件:如恒定的酸堿度(pH值:7.2-7.4)、穩(wěn)定的溫度(37°C)、較高的相對(duì)濕度(95%)、穩(wěn)定的CO2水平(5%),這就是為什么上述領(lǐng)域的研究員如此熱衷于使用方便穩(wěn)定可靠的二氧化碳培養(yǎng)箱。

此外,由于增加了二氧化碳濃度控制,并且使用微控制器對(duì)培養(yǎng)箱溫度進(jìn)行精確控制,使生物細(xì)胞,組織等的培養(yǎng)成功率、效率都得到改善?傊,二氧化碳培養(yǎng)箱是普通電熱恒溫培養(yǎng)箱不可替代的新型培養(yǎng)箱。

使用者對(duì)二氧化碳培養(yǎng)箱的選購(gòu)最關(guān)心的當(dāng)然就是其可靠性、污染物的控制和使用方便。CO2培養(yǎng)箱主要控制模擬活體內(nèi)環(huán)境相關(guān)的3個(gè)基本變量:穩(wěn)定的CO2水平、溫度、相對(duì)濕度。要有穩(wěn)定的培養(yǎng)環(huán)境,就要考慮這三方面的影響因素,選購(gòu)時(shí),就應(yīng)該對(duì)這些“重中之重"有一定的了解才能選到適合自己的儀器。但是,其它的一些方面的“小"因素也不能忽略,因?yàn)檫@些都會(huì)影響儀器的使用價(jià)值和壽命。選購(gòu)時(shí),就應(yīng)該從各方面的因素加以考慮。

溫度控制:

保持培養(yǎng)箱內(nèi)恒定的溫度是維持細(xì)胞健康生長(zhǎng)的重要因素。當(dāng)選購(gòu)二氧化碳培養(yǎng)箱時(shí),有兩種類(lèi)型的加熱結(jié)構(gòu)可供選擇:氣套式加熱和水套式加熱。雖然這兩種加熱系統(tǒng)都是精確和可靠的,但是它們都有著各自的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。水套式培養(yǎng)箱是通過(guò)一個(gè)獨(dú)立的熱水間隔間包圍內(nèi)部的箱體來(lái)維持溫度恒定的。熱水通過(guò)自然對(duì)流在箱體內(nèi)循環(huán)流動(dòng),熱量通過(guò)輻射傳遞到箱體內(nèi)部從而保持了溫度的恒定。獨(dú)特的水套式設(shè)計(jì)有其優(yōu)點(diǎn):水是一種很好的絕熱物質(zhì),當(dāng)遇到斷電的時(shí)候,水套式系統(tǒng)就能更可靠地長(zhǎng)久保持培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性(維持溫度恒定的時(shí)間是氣套式系統(tǒng)的4-5倍)。如果您的實(shí)驗(yàn)環(huán)境不太穩(wěn)定(如有用電限制,或者經(jīng)常停電)并需要保持長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定的培養(yǎng)條件,此時(shí),水套式設(shè)計(jì)的二氧化碳培養(yǎng)箱就是您最好的選擇。而氣套式加熱系統(tǒng)是通過(guò)箱體內(nèi)的加熱器直接對(duì)箱內(nèi)氣體進(jìn)行加熱的。氣套式設(shè)計(jì)在箱門(mén)頻繁開(kāi)關(guān)引起的溫度經(jīng)常性改變的情況下能夠迅速恢復(fù)箱體內(nèi)的溫度穩(wěn)定。因此,氣套式與水套式相比,具有加熱快,溫度的恢復(fù)比水套式培養(yǎng)箱迅速的特點(diǎn),特別有利于短期培養(yǎng)以及需要箱門(mén)頻繁開(kāi)關(guān)的培養(yǎng)。此外,對(duì)于使用者來(lái)說(shuō)氣套式設(shè)計(jì)比水套式更簡(jiǎn)單化(水套式需要對(duì)水箱進(jìn)行加水、清空和清洗,并要經(jīng)常監(jiān)控水箱運(yùn)作的情況)。在購(gòu)買(mǎi)氣套式培養(yǎng)箱時(shí),要注意的是:為了不影響培養(yǎng),培養(yǎng)箱還應(yīng)該有一個(gè)風(fēng)扇以保證箱內(nèi)空氣的流通和循環(huán),此裝置還有助于箱內(nèi)溫度、CO2和相對(duì)濕度的迅速恢復(fù)。

此外,有些類(lèi)型的二氧化碳培養(yǎng)箱還具備外門(mén)及輔助加熱系統(tǒng),這個(gè)系統(tǒng)能加熱內(nèi)門(mén),提供給細(xì)胞良好的濕度環(huán)境,保證細(xì)胞滲透壓維持平衡,且可有效防止形成冷凝水以保持培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度和溫度。如果您的培養(yǎng)環(huán)境需要精確的控制,那么這個(gè)輔助系統(tǒng)則是必不可少的。

CO2控制:

CO2 濃度探測(cè)可通過(guò)兩種控制系統(tǒng)——紅外傳感器(IR)或熱傳導(dǎo)傳感器(TC)進(jìn)行測(cè)量。當(dāng)二氧化碳培養(yǎng)箱的門(mén)被打開(kāi)時(shí),CO2從箱體內(nèi)漏出,此時(shí)傳感器就會(huì)探測(cè)到CO2濃度的降低,并做出及時(shí)的反應(yīng),重新注入CO2使其恢復(fù)到原先預(yù)設(shè)的水平。熱傳導(dǎo)傳感器(TC)監(jiān)控CO2濃度的工作原理是通過(guò)測(cè)量?jī)蓚(gè)電熱調(diào)節(jié)器(一個(gè)調(diào)節(jié)器暴露于箱體環(huán)境內(nèi),另一個(gè)則是封閉的)之間的電阻變化來(lái)實(shí)現(xiàn)的。箱內(nèi)CO2濃度的變化會(huì)改變兩個(gè)電熱調(diào)節(jié)器間的電阻,從而促使傳感器產(chǎn)生反應(yīng)以達(dá)到調(diào)節(jié)CO2水平的作用。TC控制系統(tǒng)的一個(gè)缺點(diǎn)就是箱內(nèi)溫度和相對(duì)濕度的改變會(huì)影響傳感器的精確度。當(dāng)箱門(mén)被頻繁打開(kāi)時(shí),不僅CO2濃度,溫度和相對(duì)濕度也會(huì)發(fā)生很大的波動(dòng),因而影響了TC傳感器的精度。當(dāng)需要精確的培養(yǎng)條件和頻繁開(kāi)啟培養(yǎng)箱門(mén)時(shí),此控制系統(tǒng)就顯得不太適用了。紅外傳感器(IR)作為另一個(gè)可選擇的控制系統(tǒng)比TC系統(tǒng)具備更精確的CO2控制能力,它是通過(guò)一個(gè)光學(xué)傳感器來(lái)檢測(cè)CO2水平的。IR系統(tǒng)包括一個(gè)紅外發(fā)射器和一個(gè)傳感器,當(dāng)箱體內(nèi)的CO2吸收了發(fā)射器發(fā)射的部分紅外線之后,傳感器就可以檢測(cè)出紅外線的減少量,而被吸收紅外線的量正好對(duì)應(yīng)于箱體內(nèi)CO2的水平,從而可以得出箱體內(nèi)CO2的濃度。因?yàn)?/span>IR系統(tǒng)不會(huì)因溫度和相對(duì)濕度的改變而受到影響,所以它比TC系統(tǒng)更精確,特別適用于需要頻繁開(kāi)啟培養(yǎng)箱門(mén)的細(xì)胞培養(yǎng)。然而,此系統(tǒng)比TC系統(tǒng)更貴,這時(shí)就要結(jié)合經(jīng)費(fèi)預(yù)算進(jìn)行考慮了。

相對(duì)濕度控制:

培養(yǎng)箱內(nèi)相對(duì)濕度的控制是非常重要的,維持足夠的濕度水平才能保證不會(huì)由于過(guò)度干燥而導(dǎo)致培養(yǎng)失敗。大型的二氧化碳培養(yǎng)箱是用蒸汽發(fā)生器或噴霧器來(lái)控制相對(duì)濕度水平的,而大多數(shù)中、小型培養(yǎng)箱則是通過(guò)濕度控制面板(humidity pans)的蒸發(fā)作用產(chǎn)生濕氣的(其產(chǎn)生的相對(duì)濕度水平可達(dá)95-98%)。一些培養(yǎng)箱有一個(gè)能在加熱的控制面板上保持水份的濕度蓄水池(humidity reservoir),這樣可以增強(qiáng)蒸發(fā)作用,此蓄水池能增加相對(duì)濕度水平達(dá)97-98%。但是,這個(gè)系統(tǒng)也更復(fù)雜,由于復(fù)雜結(jié)構(gòu)的增加一些難以預(yù)料的問(wèn)題也會(huì)在使用過(guò)程中出現(xiàn)。

微處理控制系統(tǒng):

每一個(gè)使用者都希望所用的儀器能夠方便好用,微處理控制系統(tǒng)和其它各種功能附件(如高溫自動(dòng)調(diào)節(jié)和警報(bào)裝置、CO2警報(bào)裝置、密碼保護(hù)設(shè)置、自動(dòng)校準(zhǔn)系統(tǒng)等等)的運(yùn)用,就使得二氧化碳培養(yǎng)箱的操作和控制都非常的簡(jiǎn)便。微處理控制系統(tǒng)是維持培養(yǎng)箱內(nèi)溫度、濕度和CO2 濃度穩(wěn)態(tài)的操作系統(tǒng)。例如PIC微處理器控制系統(tǒng),它能?chē)?yán)格控制氣體的濃度并將其損耗降至極低水平,以保證培養(yǎng)環(huán)境恒定不變,且能保證長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程中箱內(nèi)溫度精確,并有LED 顯示,可設(shè)置、校正溫度和CO2濃度。不同的微處理系統(tǒng)雖然名字不相同,但是其原理與控制效果則無(wú)甚區(qū)別,選購(gòu)時(shí)不必太在意它們名字上的區(qū)別,關(guān)鍵是要自己覺(jué)得使用起來(lái)方便,容易操作,而且要能夠達(dá)到所需的控制精度。

         此外,我想一個(gè)報(bào)警系統(tǒng)也是不可少的吧,它能讓你及時(shí)知道培養(yǎng)箱出現(xiàn)的情況,并做出反應(yīng),從而最大限度地降低了損失,保證實(shí)驗(yàn)的連續(xù)性。有些培養(yǎng)箱有聲/光報(bào)警裝置,溫度變化達(dá)±0.5℃,或CO2 濃度變化達(dá)±5時(shí),即會(huì)自動(dòng)報(bào)警;有些具有CO2濃度異常報(bào)警顯示功能。這些裝置都是為了方便使用者,以減少繁瑣枯燥的實(shí)驗(yàn)過(guò)程而設(shè)計(jì)的。

污染物的控制:

污染是導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)失敗的一個(gè)主要因素,因而,二氧化碳培養(yǎng)箱的制造商們?cè)O(shè)計(jì)了多種不同的裝置去減少和防止污染的發(fā)生,其主要途徑都是盡量減少微生物可以生長(zhǎng)的區(qū)域和表面,并結(jié)合自動(dòng)排除污染裝置來(lái)有效防止污染的產(chǎn)生。例如,鑒于CO2培養(yǎng)箱在使用過(guò)程中有時(shí)會(huì)伴有霉菌生長(zhǎng),為確保培養(yǎng)箱免受污染且保證儀器箱體內(nèi)的生物清潔性,有些公司開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)了帶有紫外清潔功能的增強(qiáng)型CO2培養(yǎng)箱;還有公司設(shè)計(jì)的特有銅外殼HEPA濾器能過(guò)濾培養(yǎng)箱內(nèi)空氣,可過(guò)濾除去99.970.3um以上的顆粒,并能有效殺死過(guò)濾時(shí)被擋在濾器內(nèi)的微生物顆粒;此外,自動(dòng)殺菌裝置能使箱內(nèi)溫度達(dá)到90℃從而殺死污染微生物,當(dāng)它與HEPA系統(tǒng)結(jié)合使用就能夠極大的減少污染。這些裝置對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)說(shuō)是必不可少,但選擇何種清潔裝置呢?當(dāng)然功能越多越好的最適用,但是價(jià)格也會(huì)隨之上升。如果經(jīng)費(fèi)有限,只能選擇一個(gè)價(jià)格較便宜的,這時(shí)就應(yīng)該配合使用一些消毒劑和除菌劑,經(jīng)常進(jìn)行消毒滅菌,也能達(dá)到貴儀器的效果,只是比較麻煩一點(diǎn)而已?傊瑹o(wú)論選擇何種裝置,都要時(shí)刻注意保持培養(yǎng)箱的清潔,經(jīng)常清理箱體,這樣才能增加儀器的使用壽命,并使實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行,保證結(jié)果的可靠性。


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